Immunofluorestsentsi otsene tuvastamine

Kudede struktuuride, antikehade ja patogeenide tõendid immuunsuse märgistamise kaudu on populaarsed, kaasaegsed ja täpsed. Immunofluorestsents viitab immuunsuse märgistamisele valmistatud fluorestsentsi antikehadega, mis pannakse ultraviolettvalguses hõõguma.

Juures Immunofluorestsentsi otsene tuvastamine substraati uuritakse otse helendavate antikehadega, ilma primaarsete antikehade või kunstlike antigeenideta.

Mis on otsene immunofluorestsentsi tuvastamine?

Immunofluorestsentsi otsene tuvastamine on diagnostiline meetod, mis põhineb teadmistel immunoloogia, immunovärvimise ja immunohistokeemia kohta. Siin keskendutakse antikehade võimele seostuda konkreetsete punktidega koes või seerumi antigeenidega. Need kohad on epitoobid.

Biokeemilises diagnostikas on olemas kunstlikud antikehad või jäljendajad (ainsuses: jäljendavad), mis võimaldavad neid antikeha-antigeeni sidemeid tähistada fluorestsentsi või radioaktiivsusega. Kunstlikud antikehakonjugaadid seostuvad ühelt poolt epitoopidega ja teiselt poolt immunofluorestsentsi korral fluorestsentsmarkeriga. See on alternatiiv radioaktiivsete markerite kasutamisele. Immunofluorestsentsi otsese tuvastamise ja kaudse tuvastamise eripära on see, et antikeha, mis seostub uuritud materjali antigeeni epitoobiga, esindab ka fluorestsentsmarkeriga konjugeeritud antikeha. Täiendavad antikehad pole otseseks tuvastamiseks vajalikud.

UV-valguses säravat fluorestseiini ja fluorestseiini isotiotsüanaati (FITC) kasutatakse värvainetena kunstlike antikehakonjugaatide valmistamiseks immunofluorestsentsil. Siiani on see pisut keeruline, kuid otsene immunofluorestsentsi tuvastamine on standardne meditsiiniline laboratoorne diagnostikameetod mitmesuguste meditsiiniliste küsimuste jaoks. Fluorestsentsvärviga antikehad on müügiks valmis.

Funktsioon, mõju ja eesmärgid

Kudede uurimiseks on kudede teatavate struktuuride värvimiseks saadaval immunofluorestsentsi otsene tuvastamine. Kuid need on saadaval ka üksikute lahtrite jaoks. Siin mängib suurt rolli voolutsütomeetria. Lõpuks on olemas tahke ja vedela faasi immuuntestid. Kudede immunofluorestsentsuuringud on eriti olulised onkoloogias, st vähihaiguste ravimisel.

Kasvajaspetsiifilisi antigeene kasvajakoes saab tuvastada otse immunofluorestsentsi abil. Need kasvajate koeproovide uuringud on sageli olulised selleks, et välja selgitada, kust olemasolevad metastaasid kehas tekkisid, või otsustamiseks, kas kasvaja on healoomuline või pahaloomuline. Üksikute rakkude uurimisel otsese immunofluorestsentsi tuvastamisega kasutatakse viiruse antigeenide, bakteriaalsete antigeenide ja muude epitoopide leidmist.

Näiteks saate teada, kas rakud on nakatunud viirusega ja millises nakkustsükli etapis rakud asuvad. Nimi FACS (= fluorestsents-aktiveeritud rakkude sorteerimine) on ülitõhus voolutsütomeetria meetod, milles fluorestsentsiga tähistatud rakud jaotatakse erinevatesse katseklaasidesse sõltuvalt värvi tüübist. See protseduur on oluline immunoloogias, hematoloogias ja nakkushaiguste korral.

Immunofluorestsentsi immunanalüüsid võimaldavad keskkonna toksiinide, geneetiliselt muundatud organismide ja teatud lisaainete otsest tuvastamist toidus. Selles eksperimentaalses seadistuses on alati kindel ja vedel faas. Ka arvukalt patogeene, sealhulgas AIDS-i põhjustavat HIV-viirust, oli võimalik otse tuvastada. Nakkus- ja autoimmuunhaiguste tuvastamisel on sageli vaja aga pigem antikehi kui antigeene. Need on kaitsemolekulid, mille moodustab keha immuunsussüsteem. Siin esitatud määratluse kohaselt ei ole sellised tõestused siis otsesed tõestused, kuna fluorestsentsi antikehad ei seo otseselt keha enda antigeenidega, vaid testimise antigeenidega.

Need katseseatatud antigeenid on omakorda seotud keha enda antikehadega. Immuunfluorestsentsi otsest tuvastamist tavaliste nakkuste, näiteks HIV-viiruste ja klamüüdia korral kasutatakse ainult spetsiaalsetes tuvastamis- ja kinnitustestides. On olemas testid veel paljude haiguste jaoks. Enamikus olukordades sobib antikehade kaudne tuvastamine nakkushaiguste korral, kuna keha enda immuunsussüsteemil on geniaalne võime varasemaid nakkusi meeles pidada. Teistes olukordades täiendavad teineteist antigeenide otsene tuvastamine ja antikehade kaudne tuvastamine. Viimased näitavad, et nakatumist on varem toimunud, samas kui esimesed annavad täpsemat teavet patogeeni aktiivsuse hetkeseisu kohta.

Ravimid leiate siit

Riskid, kõrvaltoimed ja ohud

Immunofluorestsentsi otsese tuvastamise korral, nagu ka kõigi meditsiiniliste tõendite puhul, on kaks riski: vale, positiivse tulemuse ja vale, negatiivse tulemuse oht. Valed, positiivsed tulemused põhjustavad patsiendile psühholoogilist ebamugavust ja suurt stressi.

Seetõttu lisanduvad positiivsetele tulemustele täiendavad testimisprotseduurid, eriti kui diagnoos põhjustab drastilisi elumuutusi. Vale, negatiivse tulemuse oht on see, et patsient ei saa õigeaegselt teada oma tervisele ja võib-olla isegi rahvatervisele avalduvast ohust. Seetõttu on hea teha palju uuringuid ning teha müügiks valmis arvukalt erinevaid immunofluorestsentsi otseseid tuvastusi. Koos teiste haiguste ja patoloogiate otsese ja kaudse tuvastamise meetoditega suurendab see diagnoosi täpsust.

Otsene tuvastamine põhineb antikehakonjugaadil, mis seob ühelt poolt antigeenide epitoope ja põhjustab teiselt poolt ka fluorestsentsi. Seetõttu kasutatakse sellist toodet ainult ühte tüüpi katsemenetluses ja muud tüüpi katsemenetluse jaoks.See on oluline protseduuriline erinevus kaudsete tõendite osas, milles fluorestsentsi tekitavatele antikehadele eelnevad epitoobi sidumiseks primaarsed antikehad. Antikehakonjugaat sobib seetõttu erinevateks testideks. See protseduuriline erinevus erineb meditsiinilisest erinevusest antikehade kaudse tuvastamise ja antigeenide otsese tuvastamise vahel.